则相对不确定度为：综上计算
④根据100～1000uL量程的气相确定移液器检定报告，移取800uL液体的色谱酸误差为士0.5%，则相对不确定度为：
综上计算，测定在样品的鲜马前处理过程中，由于移取试剂引入的奶中不确定度为：
4.2.3 标准物质纯度引入的不确定度
本实验中所用的标准物质为37种脂肪酸甲酯混合标准品，分析不确定度时选取C16∶0棕榈酸进行计算。脂肪由标准物质证书信息可知混标中棕榈酸甲酯的度评定纯度为99.90%，则由标准品纯度引入的气相确定标准不确定度和相对不确定度分别为：
4.2.4 方法重复性引入的不确定度
分别取6份鲜马奶样品进行平行实验，测定其棕榈酸的色谱酸含量，实验结果如表2。测定
计算棕榈酸含量的鲜马平均值，并依据贝塞尔公式计算出棕榈酸含量的奶中标准偏差S：
式中x为脂肪酸的含量，n为实验的脂肪次数。根据不确定度的度评定A类评定标准，对于经过平均的气相确定结果，平均值的标准不确定度采用平均值的标准差：
计算可知，6次测定鲜马奶中脂肪酸含量的标准偏差S（rep）=0.361g/100g；测定方法重复性的标准不确定度为u（rep）=0.147g/100g；故测定鲜马奶中的棕榈酸时，由方法重复性引入的不确定度为0.225%。
4.2.5 方法回收率引入的不确定度
在评定测定鲜马奶中脂肪酸的不确定度时，通过进行加标回收实验来探究方法回收率引入的不确定度。选取脂肪酸谱图中最具显著性的脂肪酸C16∶0棕榈酸做加标回收实验，所得数据如表3。
计算加标回收率的平均值，并依据贝塞尔公式计算出加标回收率的标准偏差S，根据不确定度的A类评定标准计算回收率的标准不确定度，进而得出相对不确定度，计算方法与4.2.4中相似。
计算可知，测定鲜马奶中棕榈酸的加标回收率的标准偏差S（R）=2.40%；标准不确定度为u（R）=0.980%；进一步计算相对标准不确定度urel（R）=0.996%。故测定鲜马奶中的棕榈酸时，方法回收率引入的不确定度为0.996%。
4.3 合成不确定度的计算
综合各分量不确定度的结果，根据下式计算测定鲜马奶中脂肪酸的合成标准不确定度：
4.4 扩展不确定度的计算
参照标准JJF1059.1-2012测量不确定度评定与表示[24]，对于大多数测定不确定度的评定，按正态分布取置信水平95%，k=2。实验采用气相色谱法测定鲜马奶中脂肪酸的含量，并选取C16：0棕榈酸为标志性脂肪酸计算了不确定度。按扩展不确定度计算公式：U=k×uc，计算得到脂肪酸的扩展不确定度为：U（C16∶0）=2.42mg/100g。
综上，对于本次实验的鲜马奶样品，其中棕榈酸的含量可表示为：（65.4±2.42）mg/100g，k=2，p=95%。
5 结论
将鲜马奶样品甲酯化后经气相色谱法测定其中的脂肪酸含量，结果表明鲜马奶中脂肪酸组成较为丰富，具有独特的营养价值。选取含量较高的棕榈酸C16∶0对该实验方法进行验证，可知棕榈酸甲酯在50.75～1015μg/mL范围内有良好的线性关系；同一样品的实验重复性较好，符合常规实验精密度的要求；选取线性范围的最低点50.75μg/mL加标时信噪比符合常规实验的检出限，可初步作为实验方法的检出限参考值；在线性范围内加标，验证可知方法的回收率在94.58%～102.1%之间。
评定方法的不确定度时，根据实验操作和结果计算分析得出称取样品误差m、移取试剂体积误差V、标准物质纯度误差P、方法重复性误差rep、方法回收率误差R的不确定度分量分别为：0.000576%、1.55%、0.0578%、0.225%、0.996%。显然，称取样品引入的不确定度对总的不确定贡献基本可以忽略不计，说明采用该精度的天平足以达到要求；方法重复性引入的不确定度也较小，证明该方法复现性较强；标准物质纯度在实验中需纳入计算范围，保证实验结果的准确性；移取试剂体积和方法回收率引入的不确定度相对重要，在实际的实验操作中需要从人为和仪器容器因素多方面保证精确度；每次实验时同时做加标回收实验，保证测定结果的准确性。
此外，在本文中为方便计算和讨论，只选取了棕榈酸C16∶0为例进行分析。如需进一步验证气相色谱法测定其他脂肪酸的含量及不确定度时，可依照此方法增加相应的内容。
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